Clonación y filogenia molecular de un segmento del gen codante de la actina de Myrciaria dubia "camu camu": un candidato para gen de referencia

Abstract

[ES] Myrciaria dubia “camu-camu” es un frutal amazónico caracterizado por su amplia variación de vitamina C. Pero los estudios genético moleculares que puedan explicar esta variación son limitados. Por ello nuestro objetivo fue realizar la clonación y filogenia molecular de un segmento del gen codante de la actina de M. dubia. Las muestras fueron obtenidas de la colección de germoplasma del INIA. Luego, el ARN fue purificado y mediante RT-PCR con cebadores degenerados se amplificó un segmento del gen. En base a la secuencia obtenida se diseñaron cebadores específicos para PCR en tiempo real. Los resultados muestran que se ha aislado, clonado y secuenciado un segmento del gen codante de actina de M. dubia y detectado su expresión en hojas, pulpa y cáscara de M. dubia. Así, con el soporte de herramientas bioinformáticas y uso de técnicas de biología molecular hemos aislado, clonado y secuenciado un segmento del gen codante de la actina de M. dubia. Asimismo, los análisis realizados muestran que el gen se expresa y presenta niveles similares de expresión en hojas, pulpa y cáscara de M. dubia. Sin embargo, es necesario realizar más experimentos a fin de verificar su estabilidad de expresión. ---- [EN] Myrciaria dubia “camu-camu” is an amazonian fruit tree characterized for its ample variation in vitamin C. But molecular genetic studies that explains this variation are limited. Hence our objective was to accomplish cloning and molecular phylogeny of the segment of actin coding gene from M. dubia. The samples were obtained from germoplasma's collection of the INIA. Next, the ARN was purified and by RT-PCR with degenerate primers was amplified a segment of the gene. After, on the basis of the sequence obtained, specific primers were designed for real time PCR. Results showed that was isolated, cloned and sequenced a segment of actin gene coding from M. dubia. Thus with the support of bioinformatics tools and molecular biology techniques we have isolated, cloned and sequenced a segment of actin coding gene from M. dubia. Additionally, analyses showed that the gene have similar expression levels in leaves, pulp and peel from M. dubia. However, it is necessary to realize more experiments in order to verify its expression stability.